締一生物生物科普：關于胎牛血清知識問答（二）

胎牛血清在細胞培養(yǎng)中受到很多實驗人的青睞，今天小編把關于胎牛血清的保存使用做一個整理，希望對于初次接觸細胞培養(yǎng)的你能夠有所裨益哦！

1、胎牛血清有必要做熱滅活嗎?  

答：實驗顯示，胎牛血清是不需要做熱滅活的。

（1）首先將胎牛血清置于50℃以上的溫度長達30分鐘是*沒有必要的。盡管如此，有些實驗室還是把胎牛血清的熱滅活作為常規(guī)來執(zhí)行。事實上， 熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。（2）Triglia和Linscott曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1，C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50％，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化。又有研究結(jié)果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用。（3）此外，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負面的影響，對血清的加熱經(jīng)常導致血清中沉淀的產(chǎn)生，導致很多營養(yǎng)因子的損失。因此，胎牛血清已無需再滅活。

總之，經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量！

2、細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎？如何處理？  

答：一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化。

那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關：（1）細胞生長過老，破碎的細胞殘骸；（2）血清質(zhì)量不好，反復凍融的結(jié)果；（3）配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長；（4）配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點；（5）培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。 

有著“細胞搭檔”贊譽的Ausbian胎牛血清，早已在各大實驗室悄然流行。2014年，Ausbian血清商標已在中國商標局注冊，目前此商標屬上海締一生物生物科技有限公司*所有。Ausbian血清目前在中國市場主要為澳洲血源的產(chǎn)品，廣泛應用于中科院、醫(yī)科院、軍科院、細胞庫、北大、清華、復旦、浙大等科研院所及大學的重點細胞實驗。