新生牛血清濃度的選擇

更新時間：2019-05-24 | 點擊率：1620

胎牛血清和新生牛血清都是細胞常用的天然培養(yǎng)基。胎牛血清常用于較難養(yǎng)、比較嬌氣的細胞和干細胞，新生牛血清通常適用于比較好養(yǎng)的細胞，特別用于病毒疫苗的工業(yè)生產(chǎn)以及廣泛的科研領域。在實際應用中，常需要確定牛血清的濃度。常用濃度為5%~20%，也有用更低濃度的牛血清，這主要依賴于所用的人工合成培養(yǎng)基的類型、組成和營養(yǎng)程度。如果合成培養(yǎng)基的營養(yǎng)較豐富，那么可適當降低牛血清的濃度。它也依賴于所培養(yǎng)的細胞類型和培養(yǎng)的目的。下面以水牛卵母細胞為例。

在2008年，廣西大學等單位曾報道了不同濃度牛血清和白蛋白對水牛卵母細胞體外成熟的影響。卵母細胞的體外成熟是胚胎體外生產(chǎn)技術中的關鍵環(huán)節(jié)。

研究人員將經(jīng)卵母細胞清洗2--3遍后，放入預先平衡過的不同濃度的牛血清(ECS，F(xiàn)CS，注：ECS為發(fā)情牛血清)及牛血清白蛋白(BSA)的成熟培養(yǎng)液中，其中對照組采用基礎培養(yǎng)液；并放入39℃、含5%CO及飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。基礎培養(yǎng)液為TCM199中加入一定量的激素（LH，F(xiàn)SH，雌二醇）。培養(yǎng)方式為微滴培養(yǎng)法，在60mm培養(yǎng)皿中作12～16個滴，每滴放30--40枚卵丘一卵母細胞復合體，并在培養(yǎng)液滴上面覆蓋石蠟油。

研究人員觀察了在基礎培養(yǎng)液中添加不同牛血清及其濃度分別0(對照)，10%ECS，20%ECS，10%FCS，20%FCS對水牛卵母細胞體外成熟的影響。結果顯示：10%ECS，20%ECS，10%FCS組的細胞成熟度顯著高于對照組，又以10%ECS組為突出。隨著FCS血清濃度的增加，成熟度逐漸提高，但無顯著差異。作者認為，添加血清是必要的，但不需太高的濃度。

可見，設定一個觀測指標，進行濃度梯度試驗，是可以找到一個濃度的。