大腸桿菌計數標準解讀ISO 16649-1：2018

大腸桿菌和糞大腸菌群的計數一致是一項食品衛生的常規檢測。2018年，ISO發布了新版ISO 16649-1：2018，即“食品鏈的微生物學——β-葡萄糖醛酸酶陽性大腸桿菌計數的水平方法.第1部分 使用膜和5-溴-4-氯-3-吲哚β-D-葡萄糖醛酸酐在44℃的菌落計數技術”。

ISO 16649-1:2018取代的是ISO 16649-1:2001,在如下方面有修改：

1）環境和初級食品生產階段的取樣

2）對于TBX培養基（胰胨膽鹽葡萄糖醛酸酐瓊脂）孵育時間規定至少20h

3）添加了培養基和濾膜的性能試驗

4）為了安全性，不再推薦DMSO來溶解葡萄糖醛酸酶的顯色底物BCIG

5）無機鹽改良谷氨酸鹽瓊脂（MMGA）的組成進行了調整

該標準適合食品、飼料、食品生產車間的環境樣本等。

在流程上，可分為如下幾步：

1）復蘇。

用無菌鑷子夾一張膜放到MMGA培養基的干燥表面，避免膜下產生氣泡。可用涂布棒把膜壓平。用無菌移液器將1ml樣本液加到膜中央，使用涂布棒將接種液均勻分布到整個膜表面。將平板在室溫靜置15分鐘，直到接種液浸透整個膜。再孵育4h±0.25h，37℃，膜/瓊脂表面朝上。

2）分離。

使用無菌鑷子將膜轉移到TBX培養基上。在孵箱中44℃孵育20h~24h。有藍色或藍綠色菌落則為葡萄糖醛酸酶陽性的大腸桿菌。選擇典型菌落數150的平皿進行計數。

3）結果計算和報告

世界微生物培養基生產商HiMedia公司提供有ISO的培養基，如無機鹽改良谷氨酸鹽瓊脂（Minervals-modified glutamate agar，MMGA），貨號為M643I，配方與ISO 16649-1:2018的*一致，只有氯化銨需用戶自己準備。對于TBX培養基，HiMedia公司提供有HiCrome™ E. coli Agar，貨號M1295I，配方與ISO 16649-1:2018的*一致。在該培養基中，大腸桿菌為藍綠色菌落，沙門氏菌為無色菌落，葡萄球菌被抑制生長（見下圖）。

HiMedia公司從1975年起即致力于微生物培養基和細胞培養基的生產和研發，具有WHO GMP認證、ISO9001：2008，ISO13485：2003認證，CE認證和FDA注冊登記，尤其通過CE的體外診斷注冊。其產品行銷140多個國家。

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在微生物培養和檢測領域，一如既往地為您帶來的服務。