顯色培養(yǎng)基與臨床微生物學(xué)的整合

對(duì)于許多微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，對(duì)微生物快速檢測(cè)和鑒定的能力至關(guān)重要。其中，顯色培養(yǎng)基即是一種得力的工具。和傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比，顯色培養(yǎng)基的功能越來(lái)越多，它已不再僅僅是一種分離培養(yǎng)基，而且可用于初步鑒定和篩選。它在混合菌群中能更好的鑒別目標(biāo)菌，有時(shí)是在屬的水平上，有時(shí)則達(dá)到種的水平。通過(guò)加入抗生素或其他選擇因子，顯色培養(yǎng)基可篩選多重耐藥和帶毒力因子的微生物，并能很方便地和其他自動(dòng)化的設(shè)備或分子方法相結(jié)合。

顯色培養(yǎng)基針對(duì)的是微生物體內(nèi)的特異性酶，包括糖苷酶、α和β-半乳糖苷酶、葡萄糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶和纖維二糖苷酶。其他酶包括：磷酸酶、硫酸酯酶、酯酶、氨肽酶、脂肪酶如磷脂酰肌醇-磷脂酶C（PI-PLC）和磷脂酰膽堿-磷脂酶C（PC-PLC）。一些鑒別酵母的真菌顯色培養(yǎng)基針對(duì)的則是β-氨基己糖苷酶或L-脯氨酸氨肽酶或β-半乳糖氨基酸酶。一旦底物被微生物使用，連接的顯色原（通常是無(wú)色的）將被水解或氧化/還原而產(chǎn)生特異顏色。理想情況下，顯色原、底物和水解終產(chǎn)物不能對(duì)微生物生長(zhǎng)有抑制。

有一些因素會(huì)影響顯色的靈敏度和特異性：如加入顯色原的濃度、底物類型、蛋白胨、緩沖液（離子強(qiáng)度）、添加劑等。孵育時(shí)間、孵育溫度和環(huán)境氣體成分對(duì)顯色也很重要。一些顯色原對(duì)光敏感，使得培養(yǎng)基需要特殊的存儲(chǔ)條件。

在制備好的成品顯色培養(yǎng)基中，即使保存在2-8℃，抗生素也容易發(fā)生變質(zhì)，因而需要批次的質(zhì)量監(jiān)控。隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，因?yàn)榇嬖诳股睾推渌x擇因子的不穩(wěn)定性，抗生素變質(zhì)的速率也可能變化。不同廠家的顯色培養(yǎng)基因其*的配方也會(huì)存在差異。同時(shí)對(duì)于使用不同的抗生素組合，應(yīng)廣泛檢查其對(duì)共生菌的影響，特別不要局限于國(guó)內(nèi)的菌株，而應(yīng)覆蓋所有主要的菌株。

許多臨床樣本可直接在顯色培養(yǎng)基上培養(yǎng)，孵育時(shí)間為18-24h。常見(jiàn)的目標(biāo)致病菌有：金黃色葡萄球菌、無(wú)乳鏈球菌、沙門氏菌屬、弧菌屬、李斯特菌、不動(dòng)桿菌屬、大腸埃希菌、大腸埃希菌O157：H7、腸球菌屬、克雷伯菌/腸桿菌屬/檸檬酸桿菌/沙雷菌屬，來(lái)自其他腸桿菌科的變形菌屬和念珠菌屬。

顯色培養(yǎng)基還可以對(duì)微生物耐藥和毒素進(jìn)行檢測(cè)，快速而準(zhǔn)確。顯色培養(yǎng)基加入了抑制因子（如抗生素頭孢西丁、頭孢泊肟、萬(wàn)古霉素等）和/或其他選擇因子如疊氮鈉（針對(duì)革蘭氏陰性菌），以去除共生菌或競(jìng)爭(zhēng)性可疑菌株，提高了特異性，使得只有耐藥菌能生長(zhǎng)。目前能檢測(cè)的耐藥菌包括MRSA、VRE、ESBL、KPC以及質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC β-內(nèi)酰胺酶抵抗的大腸埃希菌、克雷伯菌。還有一些真菌顯色培養(yǎng)基和快速海藻糖試驗(yàn)結(jié)合，用于鑒定光滑念珠菌，并用于快速鑒定對(duì)氟康唑敏感的血培養(yǎng)陽(yáng)性念珠菌。

在一些分子研究中，顯色培養(yǎng)基替代了DNA抽提，特別是對(duì)于一些比較難獲得的臨床樣本。在培養(yǎng)18-24h后，顯色的耐藥菌落或產(chǎn)毒菌落可進(jìn)一步表型分析或PCR分析，檢測(cè)耐藥基因或毒素基因，例如對(duì)導(dǎo)致軟組織感染的金黃色葡萄球菌，或?qū)е虑秩胄苑窝椎纳鐓^(qū)獲得性MRAS的潘頓-瓦倫丁殺白細(xì)胞毒素的檢測(cè)。

在臨床樣本中，對(duì)致病菌進(jìn)行篩查是費(fèi)時(shí)的，使用血清學(xué)和生化試劑也導(dǎo)致成本較高。而顯色培養(yǎng)基不需要昂貴而特殊的設(shè)備，省去輔助試劑和節(jié)省勞力，快速、簡(jiǎn)單、實(shí)用、經(jīng)濟(jì)，必會(huì)展開進(jìn)一步的應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

John Merlino. Applications and integration of chromogenic culture media in clinical microbiology. Microbiology Australia. 2010, Sep.: 127-130

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