弧菌顯色培養(yǎng)基（國(guó)標(biāo)）

背景　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 

弧菌天然是生長(zhǎng)在海水中，它們需要氯化鈉才能生長(zhǎng)，有些弧菌物種也可在很低的氯化鈉濃度下生長(zhǎng)^【1】。弧菌造成人類霍亂和食物中毒。霍亂弧菌引起的霍亂爆發(fā)可以追溯到人類早期對(duì)腸道感染的描述。弧菌也受到了海洋微生物學(xué)家的關(guān)注。他們觀察到在近海水域易于培養(yǎng)的細(xì)菌種屬以及那些與魚和水生貝殼類動(dòng)物有關(guān)的細(xì)菌種屬主要是弧菌屬^【1】。由于攝入了生牡蠣等污染的食物，霍亂弧菌會(huì)引起霍亂。副溶血性弧菌是食源性感染的主要原因，引起食物中毒^【2】。

原理　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

既往傳統(tǒng)使用的弧菌分離培養(yǎng)基，是TCBS瓊脂和堿性蛋白胨水^【3】。但蔗糖發(fā)酵菌會(huì)影響TCBS瓊脂上弧菌的鑒定。在HiCrome弧菌顯色培養(yǎng)基上，弧菌的顯色并不受到其他細(xì)菌菌落的影響。這是因?yàn)椋@顏色的取決于細(xì)菌β-半乳糖苷酶和培養(yǎng)基中所包含底物的反應(yīng)^【4】。霍亂弧菌呈紫色，副溶血性弧菌呈藍(lán)綠色。培養(yǎng)基中：HiVeg蛋白胨為微生物提供含碳源、氮源和必需的營(yíng)養(yǎng)。氯化鈉的高濃度除了維持滲透壓平衡，也對(duì)伴隨的微生物群落有抑制作用。在配方中使用硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉和膽酸鈉，因?yàn)樗鼈兛梢种聘锾m氏陽性菌和一些革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)，但腸桿菌科成員除外。該培養(yǎng)基中的所*的顯色混合物有助于霍亂弧菌和副溶血性弧菌的顯色鑒別。培養(yǎng)基的高（堿性）pH有助于選擇性分離弧菌屬。

應(yīng)用　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 

弧菌顯色培養(yǎng)基  用于海產(chǎn)品中分離和選擇性顯色鑒別弧菌屬。

培養(yǎng)基組分　　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 

成分                              g/L

HiVeg蛋白胨                  10.000

氯化鈉                           25.000

硫代硫酸鈉                     5.000

檸檬酸鈉                        6.000

膽酸鈉                            1.000

顯色混合物                      5.500

瓊脂                               15.000

終pH（在25℃）         8.5±0.2

質(zhì)量控制　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

● 外觀——淡黃色至淺棕色均勻自由流動(dòng)的粉末

● 成膠性——牢固，與1.5％瓊脂凝膠相當(dāng)

● 制備好的培養(yǎng)基顏色和透明度——在平皿中為淺黃色，略不透明凝膠

● 配比濃度——在25℃下6.75％w/v（6.75g/100ml水）水溶液，  pH：8.5±0.2

● pH值——8.30-8.70

配制　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

在1000毫升蒸餾水中溶解67.5克。 加熱至沸騰以*溶解。不要高壓滅菌。冷卻到45-50°C。 在倒入無菌培養(yǎng)皿之前充分混合。

培養(yǎng)結(jié)果　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 

在35-37℃溫育18-24小時(shí)后觀察到的培養(yǎng)特征。

參考文獻(xiàn)　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

1.Thompson et al (ed.). 2006. The Biology of Vibrios, ASM Press, chapter 1, pg 3.

2.Alcamo. E.I, 2001. Fundamentals of Microbiology, 6th ed, Jones and Bartlett Publishers, Inc. pg 254, 244.

3.Clesceri, Greenberg and Eaton (ed.). 1998. Standard Method for the examination of Water and Waste water, 20th ed. American Public Health Association, Washington, D. C.

4.Kudo. H. Y et al, 2001. Improved Method for Detection of Vibrio parahaemolyticus in Seafood. ASM. Vol 67, N12, pg 5819-5823.

產(chǎn)品引用文獻(xiàn)　　　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 

1. Sudha, S., et al., Prevalence and distribution of Vibrio parahaemolyticus in finfish from Cochin (south India). Veterinaria Italiana, 2012. 48(3): p. 269‐281

2. Francis Bini, Santha Sudha and A. M. Hath.Efficacy of Sodium Tripolyphosphate and Non-Phosphate Additives on the survival of Vibrio parahaemolyticus on Prawns (Fenneropenaeus indicus) (H. Milne-Edwards, 1837) during Frozen Storage.Fishery Technology.2017,54:265-272

3. Karina Grigoryan, Grigori Badalyan,Armine Harutyunyan, Mariam Sargsyan.Prevalence of gram negative and oxidase positive bacteria in trout processing factory.Journal of Hygienic Engineering and Design.2013:10-15