反復凍融胎牛血清對細胞培養實驗有影響嗎

如果實驗短期內用不完的血清反復凍融在一定程度上對血清內的蛋白活性存在影響，從而影響到細胞培養的成功率，我們來看看反復凍融都有哪些影響。

曾有研究發現，血清凍融三次，對腫瘤標志物的濃度影響不大1，對于血漿，有報道在短時間內反復凍融三次，對總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大，但作者推測對免疫球蛋白的活性有影響2。重要的是一篇西北民族學院的文章，《反復凍融新生牛血清對促細胞生長效應的影響》，作者針對SP2/0細胞，用MEM培養基和三批新生牛血清進行培養。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細胞生長曲線，根據公式t =T/A , A=log2
Y/X計算細胞倍增時間（t 為細胞倍增時間， Y 為細胞峰值前1 d 的細胞數， X 為接種細胞數， T 為細胞生長時間）。結果顯示：選用的三批新生牛血清在反復凍融 28 次時， 血清促細胞生長的大增殖量變化不大，均高于1×106/mL, 但是血清促細胞生長的倍增時間在反復凍融 20次時延長， 即血清促細胞繁殖一代所需的時間在凍融次數達到 20 次時顯著增加。筆者觀察了一下該文章的結果列表，發現在凍融20次之前，細胞倍增時間延長2-3小時不等，20次時，則延長3-4小時。可見，影響還是比較顯著的。該文章的局限是針對新生牛血清，而沒有對胎牛血清進行測試。

　　國外有人對大鼠血清中的18種化學成分進行了檢測，發現反復凍融3次對其中的14種成分沒有顯著影響，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，膽紅素，甚至包括氯離子有一些明顯變化，但其濃度變化控制在10%以內。3

　　總而言之，如果能避免牛血清的反復凍融，及時分裝，那是好的。如果在短時間內有幾次反復凍融，也不用過于擔心。但是，對于胎牛血清，還有一個問題，是反復凍融增高了血清產生沉淀或渾濁的風險。因為血清在融化時，冰塊和蛋白融化的速度是不一樣的，局部可能因蛋白濃度過高而產生沉淀。同時，如果血清內含有少量纖維蛋白原，那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀4，等到血清再融化時，沉淀就顯現出來了。所以，血清的質量也非常重要。