如何能真正有效的殺死支原體

現在，市面上的支原體清除劑大多是抗生素類的，主要是三種：四環素類、大環內酯類和喹諾酮類。它們對支原體的清除作用主要是抑制，而非直接殺死支原體。因此它們的效果不能持久，還會產生支原體的耐藥和細胞毒。要想真正有效的殺死支原體，只有德國Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold產品。

      Mynox®取自枯草桿菌發酵后的提取物。由于支原體沒有細胞壁，只有簡單的質膜。Mynox®基于生物物理原理，只與支原體膜特異性結合，改變支原體膜的通透性，導致支原體破裂死亡，而哺乳動物細胞能迅速返回它的原來形態，并保持正常的增殖速率。直至今日，Mynox®還沒有顯示任何導致正常細胞特性的改變。

     注意：Mynox®用于清除細胞培養和病毒培養以及生物樣本中的支原體和無膽甾原體，僅限于基礎研究使用。

下面，簡單介紹一下Mynox®及其用法：

Mynox®：無菌即用型，pH7.4，220µl/管，每管用1次

貨號#10-0200      2 管

貨號#10-0500      5 管

貨號#10-1000      10 管                      

2-8°C保存。室溫運輸

      建議采用DMEM或RPMI 1640培養基，5%FCS。如果清除病毒中的支原體，應使用無血清培養基。如果是貼壁細胞，應用胰酶消化，把細胞打散為單細胞，保證細胞與Mynox®充分接觸，從而更有效地殺除支原體。

Mynox®的細胞毒效應在10%~80%，依賴于作用時間長短。通常能保證有充分存活的細胞應用于繼續培養。支原體的高清除率帶來更高的細胞增殖速率，能夠彌補細胞毒帶來的損失。

Mynox®用法：

1、貼壁細胞

150px培養皿中，先后加2.8ml培養基（5%FCS），Mynox®200 µl，2 ml 細胞（1x104~1x105）。細胞繼續培養2小時，即完成治療，即可換液。治療可持續3-8天，不過需注意觀察細胞狀態。

2、懸浮細胞

無菌離心管里先后加1.6ml 含0.125%胰酶和5mM EDTA PBS，Mynox®200 µl，1.6 ml細胞（細胞數1x104~ 1x105，10%FBS）。室溫孵育30分鐘即完成治療，即可將細胞離心換液。（注意：胰酶作用是防止細胞聚集。如不用胰酶解離細胞，可用培養基代替胰酶。要保證細胞與Mynox®混合物的總體積為3.4ml，必要時添加PBS。）治療也可持續3天，不過要觀察細胞狀態。

3. 無包膜病毒

      1.5ml無菌離心管中加入1ml無血清培養基、100 µl Mynox®、125 µl病毒株和FBS（<8%）。輕輕搖勻，室溫培養2小時后即完成治療。可用培養基將Mynox®稀釋為1:10，終止反應。注意：在病毒感染宿主細胞前，應檢查宿主細胞系是否有支原體污染。

4、包膜病毒

　　注意：起始病毒滴度應>106TCID50，以保證有足夠病毒能繼續進行下游培養。

      15ml無菌離心管中加入4.4ml無血清培養基、100µlMynox®、0.5ml病毒株和FCS（<8%）

混合物總體積為5 ml。輕輕搖勻，室溫培養30分鐘即完成治療。終止方法同上。注意：在病毒從細胞培養液中收集時，可多次使用這個支原體去除過程，以確保所有支原體已被清除。

支原體清除效果鑒定：

治療后細胞或病毒可正常傳代四次后再檢測。因為支原體被殺死后，會釋放游離DNA到培養液中，此時檢測會有假陽性。推薦使用Minverva公司高敏感的Venor®Gem支原體PCR檢測試劑盒。

德國Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold產品為上海締一生物生物科技有限公司代理。清除支原體的好產品選Mynox®。