細(xì)胞中支原體的污染檢測(cè)有如下幾種方法

支原體早發(fā)現(xiàn)于1898年，1956年Robinson等*從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出支原體，之后國(guó)內(nèi)外關(guān)于支原體污染細(xì)胞的報(bào)道屢見(jiàn)不鮮。它廣泛存在于自然界中，有100余種。

現(xiàn)在只要是做細(xì)胞培養(yǎng)并發(fā)表論文，期刊就要求一定要做支原體檢測(cè)。一般要一周測(cè)一次支原體。

支原體檢測(cè)有好幾種方法。藥典規(guī)定有培養(yǎng)法和DNA染色法。

現(xiàn)在，PCR和qPCR方法也較為常用。PCR法支原體檢測(cè)原理是針對(duì)支原體16s rRNA保守序列設(shè)計(jì)引物，只要有支原體DNA擴(kuò)增片段即證明有支原體污染存在。

qPCR支原體檢測(cè)則除了引物外，還會(huì)用到探針，均熒光素標(biāo)記，從而觀(guān)察在FAM通道是否有代表支原體的擴(kuò)增曲線(xiàn)出現(xiàn)。

qPCR屬于比較高級(jí)的方法，PCR或者其他方法屬于比較普通的方法，更多用于常規(guī)科研實(shí)驗(yàn)室，PCR也可用于工業(yè)。如用于工業(yè)，則PCR和qPCR均需要完成方法學(xué)驗(yàn)證方案，證明符合歐洲等藥典。

支原體檢測(cè)還有其他幾種方法：

如生物化學(xué)發(fā)光法：它是通過(guò)支原體酶與特異底物反應(yīng)產(chǎn)生ATP， ATP濃度與其激發(fā)的熒光強(qiáng)度成線(xiàn)性關(guān)系。通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度，從而斷定是否有支原體存在。

如細(xì)胞感應(yīng)法，即通過(guò)支原體激活HEK-Blue™-2細(xì)胞上的TLR2受體，誘發(fā)分泌堿性磷酸酶，可通過(guò)專(zhuān)有培養(yǎng)基變色檢測(cè)到支原體的存在。

每種方法都有自己的長(zhǎng)處和短處，可從結(jié)果是否直觀(guān)，操作時(shí)間長(zhǎng)短，靈敏度，檢測(cè)的支原

體種類(lèi)多少，以及是檢支原體DNA還是活的支原體等方面來(lái)評(píng)價(jià)。

但對(duì)于工業(yè)放行檢測(cè)而言，迄今為止，只有具有高靈敏度的PCR法或qPCR法才用于工業(yè)，如Minerva Biolabs生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒。而其他方法都是僅能用于科研。

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