支原體qPCR檢測試劑盒的特點及操作步驟

特點

• 1. 內(nèi)控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

• 2. 高特異性，一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種（包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體）。與細菌和真核DNA無交叉反應。

• 3. 高靈敏度，最di檢測限可達到≤10CFU/ml。

• 4. 有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

• 5.有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。

操作步驟

第1步：樣本處理

a.細胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說明：

①樣品基質(zhì)可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。

②細胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。 建議：樣本做DNA抽提處理，實現(xiàn)最高靈敏度。 推薦：德國MB公司生產(chǎn)的專用支原體DNA提取試劑盒 Venor® Gem Sample Preparation Kit 該DNA抽提試劑盒已經(jīng)過廣泛驗證。

第2步：試劑制備

a. 凍干粉溶解

b. 反應體系制備 b1) 樣品為細胞上清篩查——反應體系制備

b2) 樣品為生物藥——反應體系制備

第3步：啟動熒光定量PCR儀

第4步：結(jié)果判別 FAM通道：檢測支原體熒光信號。HEX通道：檢測內(nèi)控對照熒光信號。 支原體DNA和內(nèi)控DNA存在信號的競爭性抑制。 支原體DNA越多，F(xiàn)AM通道信號越高，檢測內(nèi)控對照的HEX通道信號越低。 定量需基于Ct值和DNA標準曲線。 Ct＜40為陽性結(jié)果。Ct≥40為陰性結(jié)果。

示意圖：

儲存條件 2~8℃保存至少12個月。復溶后-18℃以下保存