如何識破支原體污染

支原體（mycoplasma）是一種沒有細胞壁的最小原核細胞。在細胞培養過程中，支原體污染率達到60%以上，當細胞（特別是傳代細胞）被支原體污染后，細胞內的DNA、RNA及蛋白表達發生改變，污染嚴重時細胞生長緩慢，細胞形態發生改變，并出現細胞病變。因而細胞培養過程中，防止支原體污染是一個世界性的難題。

支原體污染細胞后很難察覺，同時若細胞培養過程受到了支原體污染，*清除支原體也是非常困難的。因此在細胞培養過程中，定期進行支原體檢測，在源頭上清除支原體污染，并做好支原體預防工作顯得尤為重要。翊圣生物為了呵護您的細胞免受支原體的污染，除提供支原體檢測試劑盒以外，還包括支原體清除試劑和對正常細胞提供支原體預防試劑，以防支原體污染。

支原體污染的檢測及鑒定方法

01、分離培養法

支原體的病原學檢測主要是從被污染的細胞、雞胚中分離培養出支原體來確定，分離培養法是檢測支原體污染中最為可靠準確的方法。但是支原體對環境的影響敏感，容易被滅活，而且分離培養操作相對繁瑣，所需時間較長，因此只能夠對支原體污染進行定性觀察。分離培養法在常規的支原體檢測中多用于輔助其它檢測方法。

02、DNA熒光染色法

DNA熒光染色法較分離培養法縮短了檢測周期，主要用于細胞培養中污染支原體的檢測。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑（Bisbenzimidzole）Hoechst33258能夠結合支原體DNA中的A-T堿基富集區域的原理，被支原體污染的細胞經染色后，其細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一的熒光點，即是富含A-T堿基區域的支原體DNA。

03、PCR技術

PCR作為一種快速、靈敏、特異且簡便的基因診斷技術已應用于科學研究和疾病的診斷。根據支原體基因組內的保守序列設計特異引物，對待檢樣品的核酸進行擴增，通過對擴增產物的大小分析作出診斷。PCR檢測技術用于支原體污染的檢測，周期短、靈敏度高、特異性好、操作簡單且一次可檢測大量樣品。

04、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA用于支原體污染的檢測中，有著良好的特異性和敏感性，一次可以完成大量樣品的檢測。如今已有LONZA等公司開發了針對細胞中污染支原體的檢測試劑盒，具有簡便、快速與定量定性檢測等特點。

05、電鏡

一般在細胞培養48～72小時，細胞接近匯合前，用胰酶消化細胞制成細胞懸液后進行固定、包埋、切片后才能進行觀察。

06、定期檢測

支原體感染會使培養細胞慢慢枯萎，因此對培養細胞定期進行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應該進行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規化堅持下去，是細胞培養實驗室應對支原體感染的關鍵。

Mycoplasma OffTM是一款支原體噴霧劑，用于清除工作區域中的支原體。它起效快（10秒鐘即起效），安全無毒，對細胞不會產生不良影響，噴灑后，可再用干凈紙張擦拭即可。對于工作臺以及各種細胞操作的器具表面，均可使用。如果是需要避免沾染液體的電子設備，可使用Mycoplasma OffTM濕巾擦拭。