細胞培養的具體步驟是什么？

細胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長，在培養的過程中細胞不再形成組織（動物）。培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中，由于環境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響，培養時間加長，傳代導致細胞出現單一化型。

一、細胞復蘇

將凍存細2113胞從液氮5261中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融4102化。移人15ml離心管中，加入10ml預熱1653的DMEM*培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10mlDMEM培養基清洗，棄上清液。加入10mlDMEM*培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加人1mlDMEM*培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。

加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10mlPBS（經高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM*培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。

加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。

凍存液的配制：70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

科研實驗中，細胞的體外培養一直是一個重要環節。細胞要養好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細胞培養，尤其適合難養細胞，如：干細胞、肝細胞，神經細胞，原代培養、細胞融合、轉染細胞等。