您了解支原體qPCR法嗎？

在細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細胞培養中常遇見的有細菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染，估計細胞培養的同學就開始犯愁了，細胞培養的老手都知道，支原體污染非常不易察覺。有的實驗室被支原體污染后，如果不進行有效*的支原體清除，該實驗的細胞培養很難進行下去，細胞傳代3代以后狀態就急劇下滑，無法進行正常實驗，有的實驗室甚至只能指望換細胞間。那么怎樣才能有效檢測并清除支原體污染呢?

支原體qPCR法介紹：

熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應的實時監測，簡稱qPCR。

優點：①靈敏度高、特異性強。

②時間短，2-3小時出結果。

③檢測結果可定量。

④操作簡便。

缺點：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會出現假陽性。（可用培養法做補充驗證）

②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專業人員推薦指導下使用。

『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據操作步驟的細微差別，

分『經典法』和『一步法』兩種。

此兩類試劑盒較其他廠家同類產品，具有以下*的優點：

①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察。

（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應）

 

特點

1. 內控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2. 高特異性，一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種（包括歐洲藥典規定的9種支原體）。與細菌和真核DNA無交叉反應。

3. 高靈敏度，zui低檢測限可達到≤10CFU/ml。

4. 有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

5.有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。