二倍體細胞培養方法原理及實驗步驟

實驗方法原理

二倍體細胞來源體內二倍體細胞，也即正常細胞的初代培養。初代培養細胞成功后能始終保持二倍體細胞性狀，便成為二倍體細胞培養。
二倍體細胞雖不難培養，但欲求長期呈旺盛地增殖生長、并保持二倍體細胞性狀，亦非易事。為此必須采取一些有效的措施，一是低溫凍存，二是妥善的培養方法。
用反復傳代的方法以求獲得大量細胞和維持細胞長期生存的辦法是不妥的。因在反復傳代中，難免由于培養條件的變化和其它不利影響，使細胞生物學性狀發生變化。隨時間延長不僅能導致細胞停止生長，并可失掉二倍體性狀或發生轉化。

實驗步驟

二倍體細胞培養方法與一般培養相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為

1. 吸除舊培養液注入另瓶中；

2. 用BSS沖洗1 次；

3. 用0.25%胰蛋白酶消化，加入消化液量以僅覆蓋住細胞層即可；作用1~5 分鐘；

4. 待細胞附著松動、細胞質邊緣卷起和間隔加大，便終止消化；為防止細胞丟失可不必再用BSS沖洗，直接向瓶中加入培養液（新舊培養液按2：1）新舊混合；

5. 輕輕反復吹打制成單個細胞懸液（消化不足或吹打不充分，易形成細胞團，不利于生長，應注意避免）；

6. 按一分為二比例接種培養。

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