介紹排除雜細胞的方法

介紹排除雜細胞的方法：

1、使用含肝素的培養液：

在培養液中加入90 U／ml的肝素，可使內皮細胞純度提高；

2、在相差顯微鏡下刮去明顯的雜細胞群。

表皮細胞:

來源：小兒包皮、全皮細胞不易與成纖維細胞混合生長區分。

以膠原為底物；

溫度低易生長；

在培養基中加入氫化ke的松(10g/ml）；或 10-6 異丙腎上腺素；或10-10霍亂毒素；或10ng/ml表皮生長因子；

上述任何一種物質細胞易生長。

巨噬細胞：

特點：保持原有形態和吞噬物功能，易于分離不易建立傳代細胞系，生存2～3周

無刺激：小鼠/只 2 ～ 3?106個/只

刺激物：牛血清、礦物油、硫羥乙酸鹽，刺激1ml/只 20 ～30 ?106 個/只,但刺激物難消化掉，殘留在細胞內，干擾細胞生長。

用40ugPHA注射腹腔中 6 ～ 18 ?106 個/只，效果好。

乳腺細胞：

來源：腺上皮細胞

消化：膠原酶

注意：接種底物加膠原

使用1640培養基加10％小牛血清,補加氫化ke的松、胰島素；乳腺細胞易生長。

心肌細胞：

來源：心室肌,1～3ｄ齡, 剪成0 .5～1ｍｍ3大小組織塊,放入錐形瓶中。消化：加入 (0. 8ｇ/Ｌ)膠原酶Ⅰ,在37℃水浴,磁力攪拌器轉速為100ｒ/ｍｉｎ,消化10分鐘。

消化:膠原酶Ⅰ, 0.25%胰蛋白酶

易于生長：50ｍｇ/Ｌ多聚賴氨酸涂在培養瓶內.

注意：分次消化可減輕膠原酶或胰蛋白酶對單細胞的破壞作用。消化溫度在35～37℃左右,過高溫度會增加膠原酶或胰蛋白酶的毒性,溫度過低會降低膠原酶或胰蛋白酶的活性。

心肌細胞質量評價：

純度鑒定:鏡下觀察、計數純化后的細胞；

觀察：心肌細胞成圓型 成纖維細胞成梭形,

計算：心肌細胞純度=心肌細胞數/(心肌細胞數+成纖維細胞數)×100%。

神經細胞：

消化：0.1%胰蛋白酶

10－5 M 阿糖胞苷去除膠質細胞。

成纖維細胞

建立細胞株系的常用

來源：以人胚皮膚、幼兒包皮為好

消化：胰蛋白酶

注意：

1.從細胞生長到第一次傳代需1～2個月左右時間

2.以后傳代7～10天傳1次，3～4天/次（換液〕

3.無菌操作減少霉菌的污染;二性霉素抑制霉菌生長，但也能抑制細胞生長

4.如組織塊，絕對避免翻動和振動，否則組織塊不易附著或附著后脫落.

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