常規細胞實驗大匯總~細胞凋亡實驗

在很多課題中，細胞實驗都是*的。除了之前我們介紹的細胞復蘇、傳代和凍存這“基礎三件套"之外，還有許多常見的操作，需要我們了解甚至是熟練掌握。

磷脂酰絲氨酸外翻分析：又叫做Annexin V法，常用來檢測細胞凋亡。

檢測原理：

磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力特異性結合。將Annexin-V進行熒光素(FITC、PE)或biotin標記，以標記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開來。

用途：用于區分早期凋亡的細胞與晚期凋亡加壞死的細胞。適合懸浮培養的細胞。

特點：某些細胞的細胞膜外表面帶有大量的PS，因而也不能使用該方法(比如巨核細胞、血小板、某些骨髓系細胞)；靈敏度高、方便快捷；只適用于活細胞，不能用能破壞細胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。

磷脂酰絲氨酸外翻分析

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