葉酸測定培養基菌株活化及菌懸液制備方法及注意事項

　　葉酸測定培養基葉酸是鼠李糖乳桿菌生長所需的營養素，在一定控制條件下，將鼠李糖乳桿菌液接種至含有式樣液的培養液中，培養一段時間后測定透光率（或吸光度值），根據葉酸含量與透光率（或吸光度值）的標準曲線計算出試樣中葉酸的含量。

　　葉酸測定培養基的菌株活化及菌懸液制備

　　1.將鼠李糖乳桿菌轉接至瓊脂培養基中，在37℃±1℃培養箱中培養20h-24h，連續傳中2代-3代。

　　2.實驗前一天，取2mL葉酸標準工作液與4mL葉酸測定用培養液混勻，分裝至2支5mL離心管中，于121℃高壓滅菌15min即為種子培養液。待冷卻后用接種環將活化的菌株轉種至2支種子培養液中，于37℃±1℃培養箱培養20h-24h。將種子培養液混勻，無菌操作下吸取0.5mL轉種至另2支已消毒但不含葉酸的培養液中，37℃±1℃培養6h，振蕩混勻，制成接種液，立即使用。

　　注意事項：制備菌株過程需注意嚴格進行無菌操作，防止污染雜菌。

　　葉酸測定培養基的樣品處理

　　1.直接提取法：稱取固體試樣或液體試樣0.5g-2g（精確到0.001g），轉入100mL錐形瓶中，加入80mL氫氧化鈉乙醇溶液，超聲振蕩2h-4h至試樣*溶解或分散，用水定容至刻度。

　　2.酶解提取法：稱取適量試樣（精確到0.001g），轉至100mL錐形瓶中，加入30mL磷酸緩沖液，振搖5min后，于121℃高壓水解15min；待試樣冷卻至室溫，加入1mL雞胰腺溶液（含有蛋白質、淀粉的試樣需另加入1mL蛋白酶-淀粉酶液）混合，加入3滴-5滴甲苯后，置于37℃±1℃培養箱內酶解16h-20h，取出轉入100mL容量瓶，加水定容至刻度，過濾。