支原體檢測方法有哪些？

支原體對細胞培養會帶來嚴重的危害，同時，它的發生率較高，肉眼不易察覺。有報道，在細胞培養室中，它的平均發生率甚至可高達63%。在生物制品中，它的發生率為1%~3%。

污染細胞的支原體主要有五個方面的可能來源：

1. 環境

2. 被污染的細胞

3. 人體表面的攜帶（如口腔、鼻腔、皮膚等）

4. 實驗試劑，如培養基、胰酶等

5. 未*消毒的實驗器具

傳統的支原體檢測方法有哪些呢？

方法一：培養法。直接將待測樣品涂布在支原體液體或固體培養基上，讓其生長，一般需要數周，才能看到菌液變渾濁或有菌落長出。 培養法是支原體檢測經典的方法，其優點是：靈敏度適中和結果可靠。但是培養法的一個主要缺點是時間周期太長，不適合作為細胞污染的快速檢測方法。

方法二：DNA的熒光染色法。熒光染劑（如Hoechst 33258，DAPI）可以結合到細胞和支原體的DNA。被支原體污染的細胞經染色后，如果在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點，即為支原體的DNA，則證明有支原體之污染。該法相對培養法快速，但是靈敏度較差。當用熒光染色法發現有支原體后，支原體的清除相對就較困難。

方法三：掃描電鏡法。將細胞樣品進行掃描電鏡拍照，如果被支原體污染可以在細胞表面看到密密麻麻的小顆粒。該方法由于要使用電子顯微鏡，不適合用作實驗室常規檢測。

方法四：PCR法。PCR法相對較快，靈敏度也較高。是目前實驗室常用的支原體檢測方法。但是PCR法也有自己的致命缺點：細胞培養液上清常含有強烈抑制PCR擴增的代謝產物。因為很多研究人員直接使用細胞培養液上清原液進行PCR檢測，如果檢測為陰性就認為沒有支原體污染。其實，還有一種可能性，就是PCR的擴增被細胞的代謝產物抑制了，而不是沒有支原體污染！

通常來說，被污染的細胞應該丟棄，以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞，以往別的品牌的支原體清除劑，其實只是抑制劑，它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成，但無法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌，可與支原體膜特異性結合，破壞膜通透性，導致支原體膨脹破裂而死。