支原體PCR絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品的說明及復(fù)溶操作

　　支原體PCR絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品對支原體PCR或qPCR方法進行驗證，除了可參考試劑盒生產(chǎn)廠家自身的驗證外（盡管它不能*替代用戶自己的驗證，但可提供特異性驗證的一些信息，如使用哺乳動物細胞DNA、某些細菌菌屬DNA等，而不必使用者自己再去嘗試），用戶自己主要是對方法的檢測限和耐用性進行驗證，這里常用的就是10CFU支原體標(biāo)準(zhǔn)品。100CFU標(biāo)準(zhǔn)品可作為一個補充。

　　支原體PCR絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品的說明：

　　1.定量標(biāo)準(zhǔn)品dna包括支原體基因組dna和細菌基因組dna，用于梯度稀釋后，qpcr標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

　　2.支原體基因組dna用于支原體核酸擴增檢測的方法學(xué)驗證，包括確定支原體qpcr方法的檢測限。

　　3.細菌定量標(biāo)準(zhǔn)品dna用于qpcr檢測水中細菌的精確定量。

　　復(fù)溶操作：

　　1.標(biāo)準(zhǔn)品短時離心，以收集凍干粉至管底。

　　2.取試劑盒提供的tris緩沖液（白蓋）100µl，加入到標(biāo)準(zhǔn)品管內(nèi)（綠蓋）。

　　3.室溫下靜置5分鐘。

　　4.渦旋混合10秒鐘，離心5秒鐘。

　　5.選合適體積的復(fù)溶dna用于pcr擴增或梯度稀釋，以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　支原體PCR絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品每批支原體都會提供CFU與基因拷貝數(shù)的比值，以方便二者的換算。因為10CFU只能確定PCR能夠達到的檢測限在10CFU以下，但無法具體確定靈敏度的數(shù)值。帶DNA拷貝數(shù)標(biāo)定的基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品則可進一步確定檢測限的數(shù)值。而且核酸法最終檢測的對象是核酸，而產(chǎn)品的QC主要關(guān)注的是支原體，核酸的存在是側(cè)面反映支原體存在的一個指標(biāo)。CFU與基因拷貝數(shù)的比值很好地對二者進行了關(guān)聯(lián)。