當前位置:首頁  >  技術文章  >  怎樣合理優化「胚胎干細胞」培養流程,細胞培養更便捷?

怎樣合理優化「胚胎干細胞」培養流程,細胞培養更便捷?

更新時間:2022-11-25  |  點擊率:884

什么是胚胎干細胞?

胚胎干細胞(embryonic stem cell, ES cell)也稱ES細胞,是一種存在于著床前早期胚胎中的具有全能性的細胞。

胚胎干細胞能在體外進行培養傳代,保持未分化二倍體狀態以及其全能性,具有形成嵌合體動物(chimeric animal)的能力。

由于其具有全能性,故廣泛用于胚胎發育及胚胎工程方面的研究。

胚胎干細胞體外培養的原則是:

在促進胚胎干細胞增殖的同時,維持其未分化二倍體狀態。胚胎干細胞一旦分化即失去其全能性,失去二倍體正常核型的細胞則會大大降低形成嵌合體(chimera)的能力,特別是進入種系形成生殖細胞的能力。

胚胎干細胞體外培養的一般方法:

目前體外培養胚胎干細胞的方法歸納起來有二大類:有飼養層培養法和無飼養層培養法。

(一)有飼養層培養法:

主要應用小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)和STO細胞作為飼養細胞(MEF 和STO都能分泌促進胚胎干細胞增殖和抑制胚胎干細胞自主分化的因子);經si裂霉素-C或γ-射線處理終止其分裂后制備成飼養單層(feeder layer),將胚胎干細胞種植在這樣的單層上。

實驗過程,主要分為以下三步:準備飼養層細胞、飼養單層制備、接種干細胞培養。

飼養層培養法卻存在著不可避免的缺點:

1、 飼養層細胞生命期有限,不能在體外長期傳代。在體外傳代時間太長,其產生促增殖因子和抑制分化因子的能力會減弱甚至喪失。

2、 MEF細胞的染色體干擾:飼養層細胞會影響干細胞遺傳物質。 

3、 si裂霉素-C的影響:飼養層細胞需要用到si裂霉素-C,該物質可能會影響干細胞的增殖。

4、 異種抗原及污染的影響:飼養層細胞作為異種抗原也會影響干細胞的健康,還有發生細胞間融、引入其他動物源性病原體,給臨床移植治療帶來風險。

5、 所用試劑復雜,批次不可控:所用材料的批次之間的波動,限制了培養物之間的可重復性。

6、 實驗周期長,培養基配制復雜:現在市場上有多種多樣的干細胞培養基可供選擇,大多數都是在基礎培養基的基礎上,添加例如白血病抑制因子(LIF)這樣的多功能細胞因子,但無論進口還是國產的產品,都不免有價格高昂的缺點。而自己配制,又會面臨操作繁瑣、易污染等問題。而且飼養層培養法從培養飼養細胞開始,至少需要一周時間才能得到所需的干細胞,周期過長。

(二)無飼養層培養法:

利用各種能分泌抑制分化因子的細胞制備條件培養基,或在基礎培養基中加入重組的LIF制備成條件培養基。使用這樣的條件培養基培養小鼠胚胎干細胞,可以不使用飼養層細胞,能保證小鼠胚胎干細胞增殖的同時維持未分化二倍體狀態。

無飼養層培養類似普通細胞培養,主要分為以下幾個步驟:培養瓶預處理、配制培養基、消化干細胞、接種、培養。

相較于飼養層培養法,無飼養層培養法的優點顯而易見:更加簡便、節省時間;但缺點也十分明顯:

1、 培養的細胞質量不穩定:由于自行配制的培養基,不可控因素較多,缺少營養細胞對的存在,干細胞生長狀況也不穩定,直接影響實驗結果。

2、 成本高昂:商品化的培養基,根據品質不同,價格也是從幾百元到幾千元不等,直接增加了干細胞的培養成本。

3、 需要不斷對培養基進行調整,對實驗人員有很高的要求:無飼養層培養法需要人為添加各種各樣的細胞因子,不同的干細胞還需要進行細微的調整以適應不同的生長需求,因此培養難度更高,對技術人員的操作水平及經驗有很高的要求。

更便捷的干細胞培養

近日,一項新技術——干細胞完quan培養基培養法問世!這項重大突破,兼顧了上述兩種培養法的優點又巧妙規避了它們的致命缺點,大大降低了干細胞培養的技術門檻!

Ausbian干細胞完quan培養基,在含微量胎牛血清的基礎培養基中,通過添加一種人永生化干細胞系的條件培養基混合組成,含有多種生長因子,具有促進干細胞增殖、抑制干細胞分化及維持干細胞表型,增加干細胞的傳代次數的作用,可廣泛應用于人及動物的胚胎干細胞、間充質干細胞及各種組織來源的成體干細胞的培養。

無需額外添加和二次配制,更省去了體現制備飼養層的復雜操作,根據細胞生長情況每2-3天更換一次培養基,使實驗更簡單,可以大大縮短時間成本;培養的干細胞品質更穩定,對實驗人員技術要求也更低,節省人力成本,輕輕松松讓干細胞茁壯成長。


主站蜘蛛池模板: 一本久久a久久精品vr综合| 亚洲精品第一国产综合精品| 婷婷五月综合缴情在线视频| 久久九色综合九色99伊人| 国产成人综合久久精品亚洲| 亚洲日韩在线中文字幕综合| 国产综合无码一区二区色蜜蜜| 婷婷激情五月综合| 一本久道久久综合狠狠躁AV | 亚州欧州一本综合天堂网| 亚洲综合精品香蕉久久网97| 伊人久久亚洲综合影院首页| 国产成人综合亚洲| 亚洲欧洲国产综合| 亚洲 综合 国产 欧洲 丝袜| 亚洲国产综合专区在线电影| 亚洲丁香婷婷综合久久| 婷婷五月综合色视频| 国产色婷婷精品综合在线 | 99久久国产综合精品1尤物| 色欲香天天综合网站| 激情五月婷婷综合网站| 国产成人亚洲综合a∨| 亚洲综合男人的天堂色婷婷| HEYZO无码综合国产精品227| 一本色道久久综合无码人妻| 亚洲香蕉网久久综合影视| 色综合久久天天综合观看| 色88久久久久高潮综合影院| 精品国产国产综合精品| 国产成人综合色视频精品| 色天使久久综合给合久久97色| 亚洲av综合avav中文| 伊人色综合久久大香| 国产成人综合精品一区| 狠狠色综合网站久久久久久久 | 97久久国产综合精品女不卡| 天天综合久久一二三区| 狠狠爱天天综合色欲网| 亚洲精品第一国产综合精品99| 图片区精品综合自拍|