支原體qPCR檢測的儀器設置和注意事項

目前在市場上，有一款支原體qPCR檢測試劑盒(英文品名：Venor®Gem qEP，廠家：德國MB) 廣受藥廠的歡迎。

該試劑盒經過全面的方法學驗證，符合歐洲藥典和日本藥典要求，適合細胞治療、CAR-T、抗體藥、疫苗等藥廠的過程控制、放行檢測以及臨床申報。要用好該試劑盒，除了嚴格遵循說明書的操作外，還有些注意事項，下面小編向您介紹一下。

一、儀器的設置

要注意你所用的qPCR儀有幾個通道，是否可檢測相應的熒光素。

MB的支原體qPCR檢測試劑盒（英文名：Venor®Gem qEP）適用的熒光定量PCR儀的機型廣泛，相關設置可從締一生物網站下載。

二、基線設置

許多qPCR儀軟件有自動基線設置功能。

但要注意，有時也需要查看原始熒光數據，了解各個樣本的基線水平。

如下圖圖1，有一些樣本的基線水平較高，就提示這些樣本可能存在一定的數據偏差或操作錯誤。

圖1. 基線校正前的曲線

三、閾值設置

許多qPCR儀軟件有自動閾值設置功能。但也應關注一下，儀器自動設定的閾值線是否合適。這需要一定的經驗。

如果閾值設定太低，會使靈敏度**化，增加假陽性的可能；

如果閾值設定太高，可能會影響靈敏度并導致假陰性。

圖2和圖3就是一個例子。

圖2. ABI 7500自動閾值的設定。

圖3. ABI 7500手動閾值的設定（熒光**值的5%）

在圖2中，有2個樣本為支原體陽性（黃線和紅線）。

在圖3中，這2個樣本中有一個變為陰性了（紅線）。

總之，閾值設定，如果是軟件自動設置，應再看一下閾值線的位置是否合適。必要時可進行手動設置。