貼壁細(xì)胞怎么高效傳代？

貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長(zhǎng)至單層鋪滿的狀態(tài)后后，空間已基本上飽和，細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖受阻，為使其繼續(xù)擴(kuò)增或生長(zhǎng)，需要進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）處理。同時(shí)，傳代培養(yǎng)也可用于細(xì)胞種的保存。不僅如此，各種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也是以高效的細(xì)胞傳代為基礎(chǔ)的。

懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。一般使用胰蛋白酶，將貼壁細(xì)胞消化成成單個(gè)細(xì)胞，也可加入EDTA提高消化能力（EDTA 是一種二價(jià)離子的螯合劑，能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+）。常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

實(shí)驗(yàn)時(shí)，先用吸去細(xì)胞培養(yǎng)上清，用PBS清洗細(xì)胞，棄掉洗滌液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)皿的大小不同，一般2-5ml消化液即可，以剛好鋪滿整個(gè)皿底為原則)，觀察細(xì)胞直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要3-5分鐘，為了避免細(xì)胞成團(tuán)，消化細(xì)胞的過程中不要拍打細(xì)胞瓶。對(duì)于特別難消化的細(xì)胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞置于37°C 促進(jìn)消化，細(xì)胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的培養(yǎng)基中止消化。

800-1000rpm，離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞類型而定。胰蛋白酶會(huì)對(duì)某些細(xì)胞的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷，對(duì)于這種類型的細(xì)胞，可用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細(xì)胞，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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