盤點核酸法檢測支原體的具體方法

核酸法檢測支原體的有點顯而易見：便捷、高效、準確率高、靈敏度高。核酸法分為普通PCR法和qPCR法。這兩種方法各有優(yōu)缺點，也各有適應(yīng)場景。

常規(guī)法PCR檢測試劑盒——Venor®GeM Classic

該試劑盒可以通過常規(guī) PCR 對研究和工業(yè)中的細胞培養(yǎng)上清液、培養(yǎng)基和生物制藥中的支原體污染進行快速、可靠和省時的常規(guī)監(jiān)測。

細胞培養(yǎng)物和培養(yǎng)基成分中的支原體（柔膜菌綱：支原體、無膽原體、螺旋體）物種都是通過高度保守的 rRNA 操縱子擴增來特異性檢測的，或者更具體地說，通過擴增支原體基因組中的 16S rRNA 編碼區(qū)來特異性檢測。在265-278 bp處檢測到支原體特異性擴增。通過使用提供的內(nèi)擴增對照（在191 bp處檢測到），可以排除由于PCR抑制劑或DNA提取不當引起的假陰性結(jié)果。

優(yōu)點：便捷成本低

缺點：無法定量

qPCR檢測試劑盒——Venor®GeM qEP

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應(yīng)的實時監(jiān)測，簡稱qPCR。

優(yōu)點：靈敏度高、特異性強、時間短，2-3小時出結(jié)果，檢測結(jié)果可定量，操作簡便

缺點：

對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性。（可用培養(yǎng)法做補充驗證）

不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內(nèi)在設(shè)計不同），需謹慎選擇，盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據(jù)操作步驟的細微差別， 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。

此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產(chǎn)品，具有以下優(yōu)點：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應(yīng)）。