細胞培養基中雙抗濃度是多少？該怎樣添加？

細胞培養基中，將常會添加“雙抗"用于預防微生物污染。細胞培養過程中用到的雙抗，一般是指青霉素和鏈霉素的組合。主要作用于細菌的細胞壁與核糖體。由于真核細胞沒有細胞壁以及核糖體與原核細胞不同，抗生素一般對真核細胞培養無害。

在細胞培養液中，一般推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。在使用時，按需配制或稀釋即可。另外，需要注意的是，抗生素對熱環境比較敏感，因此應在-20℃環境下長期保存，在2-8℃可短期保存，配制成培養液后應在一周內用完。

雖然在細胞培養過程中，雙抗被廣泛使用，并且認為對真核細胞無害，但已有研究表明，β-內酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素，對真核細胞培養有抑制增殖作用。并且這種抑制增殖作用在原代細胞和干細胞等難養細胞上尤其明顯。2017年，加州大學Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發表文章，呼吁在細胞培養過程中減少抗生素的使用[4]。他們發現抗生素（“雙抗"：青霉素和鏈霉素）的使用影響人體肝細胞中基因表達與基因調控。其中有209個基因的表達發生了改變，特別是與藥物和應激反應相關的基因。超過9,500個基因調控元件發生了變化，并且很多調節元件位于參與細胞分化，核酸酶活性和tRNA修飾的基因附近。雖然這些基因的數量在龐大的細胞基因庫中不值一提，但這絕對不是一個應該被忽略的事件。

因此，在細胞實驗中，應減少“雙抗"的使用，可通過其他方式，預防細胞發生污染。定期用支原體祛除試劑清潔、擦拭實驗臺；合理的消毒；規范的實驗操作等，都有利于預防細胞污染。

德國MB支原體預防試劑，Mycoplasma-off，不僅能祛除支原體，對其他微生物也有效。