Biocoll細胞分離液正確分離方法和操作時的注意事項

　　Biocoll細胞分離液是最早由德國Biochrom公司推出的新一代分離液。它除了可分離淋巴細胞外，更常用于胰島細胞的分離。胰島細胞的移植是一種有效的糖尿病新型療法，可解決特別是I型糖尿病患者的胰島細胞不足及功能低下的問題。

　　Biocoll細胞分離液分離方法會影響胰島的產率和存活率：

　　因此，取材時需要注意

　　1.胰臟應快速取材，保持包膜完整。

　　2.對胰臟進行評估，在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。

　　3.消化過程不宜進行震蕩，以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化，而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。

　　4.要保證胰島的包膜完整，消化不能太充分。寧可不足，也不可過頭，否則會影響胰島純化的產率。

　　Biocoll細胞分離液操作步驟及注意：

　　1.取全血，使用等量PBS稀釋。（全血：HBSS=1:1）

　　2.取離心管，加入與血稀釋液等量的PBS于管底，將血液稀釋液小心加至PBS液面上層。（小心不要使兩種溶液混合，吸頭接近液面，貼壁緩慢加入，尤其是兩種溶液剛接觸到的時候，一定要慢！慢！再慢！）

　　3.離心：800g，30min，需要將制動降至低，即離心機自然降速至0，離心完畢將得到如圖所示分層（一定要自然降速，或者只有1-2成的制動）

　　4.吸取白膜層至新15mL離心管中。

　　5.白膜層液體加10~15mlPBS離心，300g，10min，棄上清。沉淀再加PBS清洗一次，棄上清。

　　6.沉淀加入正常培養的*培養基進行培養，2~3小時，使單核細胞貼壁。

　　7.鏡下觀察細胞貼壁后，更換培養基，去除未貼壁細胞，保留下來的即為所需的單核細胞。