RNA提取試劑盒操作的詳細(xì)步驟

　　RNA提取試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組，不適合于細(xì)胞等組織內(nèi)RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)。

　　RNA提取試劑盒操作步驟

　　使用前請先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無水乙醇，加入到離瓶口約0.5-1cm距離，蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8條件下進(jìn)行。

　　1、取病毒上清液0.5ml，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀（如無沉淀可省去此步）。

　　2、向病毒上清中加入20ul10mg/ml的蛋白酶K，充分混勻，65消化10min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

　　3、吸附柱前處理：從包裝中取出吸附柱，放入收集管中，加入700ul洗柱液，室溫放置2分鐘，2-812000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中待用。

　　4、向病毒上清中加入500ul結(jié)合液，充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響RNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的最大容積為750ul，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）

　　5、12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

　　6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

　　7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

　　8、12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

　　9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65水浴預(yù)熱的RNasefreeddH2O，室溫放置5min，12000rpm離心2min。即可得到高質(zhì)量的病毒基因組RNA。