新生牛血清中微生物的電鏡檢查

更新時間：2019-05-17 | 點擊率：1654

新生牛血清是細胞大規模培養用于生產疫苗、生物藥及病毒載體的重要原材料，也是細胞學實驗常用的天然培養基。它的質量好壞對細胞形態及生長情況的影響很大，尤其是要保證其無微生物的污染，因為微生物對細胞的污染會造成實驗結果的偏差，對生物制品的安全性也構成威脅。國內外的相關部門都提出了一系列的質量檢測指標。但也有人指出其不足，如對外源微生物的檢測項目較少、不能涵蓋所有微生物的檢測；檢測度也受到方法本身的限制而不能達到很高的水平。為此, 建立快速、、廣譜的新生牛血清外源因子檢測方法是非常必要的。

有生物制品機構開發出電鏡監測微生物的方法。其主要采取的是膜表面富積法來制備電鏡樣品。將有膜電鏡載網放入裝有新生牛血清的離心管中, 5000 rPmin 離心, 然后取出載網負染。同時設立實驗組和對照組。對于細菌，設置電鏡放大1萬倍，觀察時間為 30分鐘, 當5 分鐘內檢出細菌記為/ + + + , 10分鐘檢出細菌記為/ + + , 30 分鐘內檢出記為/ +。對于病毒，設置電鏡放大3萬倍，借助目鏡觀測, 5分鐘內檢出 n種記為/ n+ + +，10分鐘內檢出記為/ n+ +，30分鐘內檢出記為/ n+。研究人員選擇了三種國內外不同新生牛血清的牌子，每個牌子的血清又選擇了3-10個批次。結果顯示，用培養基進行無菌檢測時，大部分做的比較好，只有一個牌子的一個批次出現細菌檢測陽性，其余皆陰性。但用電鏡檢查時，對照組皆為陰性，但實驗組的大部分都是陽性（陽性率高達95.6%）。病毒的陽性率為34.8%。具體病毒的部分檢測圖像如下：

在方法上，作者認為，與膜表面富積法制備的新生牛血清電鏡樣品相比, 常規負染法只能獲得極少的觀測視野, 且附著粒子極少。而膜表面富積法所制樣品可以在每個網孔取得觀測視野，粒子附著率應提高104~105倍。該方法只要求血清中的微生物數量, 不要求微生物的顆粒密度，這樣即使在微生物密度極低的情況下, 也能有效利用電鏡進行有效檢測。

作者認為，對于污染程度極低的血清, 要經過多個數量級的放大后才能在細胞

培養中體現出來。而采用針對性強的病毒檢測方法不能保證血清*避免病毒污染。因此，新生牛血清生產企業應不斷改進生產和檢測工藝, 提高產品的質量, 滿足使用單位不斷提高的質量要求。

Ausbian精制新生牛血清系新西蘭血源，澳洲生產，出廠前經嚴格質控，符合各項標準。血清經過0.22微米過濾和15kGy的gamma射線照射滅能，可殺滅細菌、支原體，無微生物風險，可滿足廣大用戶對新生牛血清的品質需求。