什么時(shí)候應(yīng)檢測(cè)支原體

支原體污染不僅是細(xì)胞培養(yǎng)中需要克服的現(xiàn)象，而且是制藥、生物制品生產(chǎn)中需要加以避免的。

圖：電鏡下的支原體

對(duì)于藥品和生物制品，出廠前基本都需要做支原體檢驗(yàn)。在這方面，《中國(guó)藥典》有詳細(xì)的規(guī)定。有些獸用疫苗出廠前也需要做支原體檢驗(yàn)，可參考《中國(guó)獸藥典》。

對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室，建議應(yīng)定期進(jìn)行支原體污染存在與否的常規(guī)監(jiān)測(cè)。原因有四：

1、支原體污染肉眼不易分辨。支原體只有電鏡下才能觀察到，早期的支原體感染沒(méi)有很明顯的特征。

2、細(xì)胞極易發(fā)生支原體污染。據(jù)對(duì)多個(gè)研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室調(diào)查顯示，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，支原體污染的發(fā)生率平均在60%以上。常規(guī)抗生素?zé)o法抑制支原體。支原體可來(lái)自環(huán)境、人的口腔、鼻咽、胰酶或者培養(yǎng)基。細(xì)胞間內(nèi)有一瓶細(xì)胞污染，其支原體極易通過(guò)氣溶膠造成傳播。

3、支原體對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾大。支原體可造成細(xì)胞的染色體斷裂和蛋白表達(dá)譜變化，爭(zhēng)奪細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)，使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可信度下降。

4、支原體檢測(cè)較為方便。現(xiàn)在吸取200ml細(xì)胞培養(yǎng)上清，采用PCR的方法，只需不到3個(gè)小時(shí)即可出結(jié)果。

 建議選用特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測(cè)支原體種類較多、省時(shí)省力的PCR試劑盒，比如德國(guó)Minerva公司出品、羅伯特·科赫研究所監(jiān)制的，其有檢測(cè)試劑盒共有四款（其中一款為熒光定量法）可加以選用，其中兩款適合工業(yè)用戶，已通過(guò)歐洲藥典認(rèn)證。其支原體檢測(cè)的配套產(chǎn)品也很豐富，例如支原體DNA提取試劑盒（非必選），支原體標(biāo)準(zhǔn)品等，

也許有人會(huì)說(shuō)，我培養(yǎng)的細(xì)胞一直都長(zhǎng)的很好，形態(tài)正常，或者說(shuō)，我已經(jīng)用了預(yù)防支原體的產(chǎn)品，我不需要作支原體檢測(cè)。但如果細(xì)胞長(zhǎng)得不好，也沒(méi)有用支原體預(yù)防劑或者有如下情況時(shí)，則強(qiáng)烈建議進(jìn)行支原體檢測(cè)。

1、實(shí)驗(yàn)室里帶進(jìn)來(lái)新細(xì)胞。新細(xì)胞是支原體污染的主要來(lái)源。在新細(xì)胞作任何用途之前，有必要隔離細(xì)胞，并檢查是否有支原體污染。

2、實(shí)驗(yàn)室里近發(fā)生過(guò)支原體污染。

3、細(xì)胞將要凍存之前，建議進(jìn)行支原體檢測(cè)。因?yàn)橹гw的存在，會(huì)導(dǎo)致液氮罐中支原體污染的傳播。