細胞死亡及生長異常

1、首先講一下細胞生長緩慢的原因：

a)更換了血清或者培養基，細胞需要一段時間適應一下；

b)由于細胞的特殊種類，培養基中缺少某些生長因子；

c)培養基中有少量真菌或者細菌污染；

d)傳代的時候細胞密度過低；

e)細胞狀態老化；

f)支原體污染。

2、解決上述問題的方法：

a)如果實驗室沒有某種細胞最適宜的培養基，可以先用原培養條件凍存一些，然后逐漸增加新的培養基比例，25%、50%、75%到100%，傳代3-5次后，讓細胞慢慢適應。

b)判斷是不是培養基發生污染，可以先不加抗生素，觀察細胞狀態。

c)增加細胞的接種密度。

d)發現細胞老化的時候，及時更換新的細胞。

e)如果懷疑是支原體污染，一定要隔離疑似污染的培養皿，及時清潔消毒孵箱。

3、造成細胞死亡的原因：

a)細胞消化過度；

b)沒有及時換液，營養成分消耗殆盡；

c)如果前一天細胞的狀態很好，換液之后就全死了，應該考慮是否是培養基或者血清的問題。

4、如何判定細胞是否發生支原體污染：可以選用直接培養法、熒光染色或PCR方法檢測，比較常用的是PCR。當細胞發生支原體污染時，原則上是能夠去除支原體的，但是整個過程耗時耗力，還要考驗個人操作能力。所以如果不是處于細胞存量很少的情況下，建議發現污染時立刻棄掉，重新培養。

5、如果孵箱中只是某種細胞持續性大量死亡，而其他細胞狀態都沒問題的話，基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細胞的真菌或細菌，遇到這種情況，小六兒也不知道該怎么做，只能是先停一段時間看看。。。。。。

6、其他注意事項：每個星期都要更換孵箱底盤中的水（紫外照射后超純水）；每兩周消毒一次孵箱：75%酒精擦拭一遍后，再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍（都用超純水配制）；可以在孵箱底部放一個燒杯，里面放入飽和硫酸銅，可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值，如果不是孵箱污染的情況很嚴重，建議不要使用。

科研實驗中，細胞的體外培養一直是一個重要環節。細胞要養好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細胞培養，尤其適合難養細胞，如：干細胞、肝細胞，神經細胞，原代培養、細胞融合、轉染細胞等。

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前，均經過嚴格質控，每個批次附有詳細完整的《檢測報告》，包括：品名，貨號，批號，血源地，生產日期，保質期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內毒素、無菌檢查（細菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等）、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清，應認真審閱《檢測報告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測報告》，可登陸“締一生物"網站，留言技術部，得到免費幫助。）

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