淺談qPCR檢測中「內參」的意義

實時熒光定量

核酸擴增檢測系統

qPCR主要是利用插入性染料或熒光探針，人們可以通過監控PCR過程中的熒光強度比較多個樣品的DNA水平。

qPCR本質就是測定樣品中某個模板的起始量ct值。但在實際操作過程中，由于之前DNA提等步驟，各個步驟存在不同的效率，在實驗過程中也存在加樣誤差、各孔溫度差等影響，每個樣本的Ct值并無法真實反映每個樣品中初始模版的絕對量，這就使得我們無法對不同處理的樣本進行分析評價。因此，我們需要一個參考標準對每一個樣本進行校正，排除其他無關因素帶來的的影響。

內控(內參，Internal Control)，也就是內部參照測量，也叫內部控制。使用內參的目的是便于在分析過程中，將不同樣品的起始量做均一化處理。內參通常選擇在不同組織中有穩定表達量或不受實驗處理影響的基因，在每個樣品中的表達量不發生變化，比如管家基因（house-keeping gene）。以小鼠為例，常用的內參有β-actin、18S rRNA、α-tublin和GAPDH等，有時也可以用基因組DNA做內參。

但需要注意的是，現在也有觀點認為，這些基因在不同組織中豐度也不同，例如GAPDH，在線粒體含量高的組織中豐度高。有時候，不同的研究實驗需要選擇不同的內參。一些文章在發表時，審稿人也會要求使用兩個內參加以證實。

MB Venor®Gem qEP，用經典的qPCR方法檢測樣品中是否含有支原體，其中也會用到內參（內控），可以在對支原體其作用也是對樣品做均一化處理，保證實驗結果的穩定。

MB Venor®Gem qEP

產品特點：

1.內控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種（包括歐洲藥典規定的9種支原體）。與細菌和真核DNA無交叉反應。

3.高靈敏度，檢測限可達到≤10CFU/ml。

4.相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

5.有相應配套的支原體定量標準品，便于最后定量檢測。